Kontaminierte Pilzkultur retten

Eine Kontamination ist nicht zwangsläufig das Ende einer Kultur. Viele Züchter werfen zu schnell weg, aus Panik, aus Ekel oder aus mangelnder Information. Je nach Art der Kontamination, Besiedlungsstand und betroffenem Medium gibt es jedoch konkrete Strategien, um den Schaden zu begrenzen und zu retten, was sich noch retten lässt. In diesem Artikel erklären wir, wie Sie eine kontaminierte Kultur retten, mit Methode, Nüchternheit und ohne falsche Hoffnungen. Denn zu wissen, wann man eingreift und wann man aufgibt, gehört ebenfalls zum Handwerk.

Sie fangen gerade mit der Pilzzucht an? Unsere Schritt-für-Schritt-Anleitung für den Einstieg in die Pilzzucht vermittelt Ihnen die Grundlagen, bevor es um Krisensituationen geht.

🔎 Schnelldiagnose: Lässt sich diese Kultur retten?

Vor dem Eingreifen prüfen

Bevor Sie etwas unternehmen, sind zwei Punkte entscheidend. Sie bestimmen alles Weitere.

1. Welche Art von Kontamination?

Aussehen und Farbe können bereits nützliche Hinweise liefern. Ein schnell wachsender grüner Schimmel lässt sich zum Beispiel nicht so behandeln wie eine lokal begrenzte bakterielle Kontamination. Um Ihre Kontamination genau zu bestimmen, lesen Sie unseren Artikel über Kontaminationen in der Pilzzucht, er liefert Ihnen alle Schlüssel zur Diagnose.

In der Regel gehören grüne oder schwarze Schimmelpilze, die schnell wachsen, zu den am schwersten einzudämmenden. Bakterielle Kontaminationen können lokal begrenzt bleiben, lassen sich aber nur schwer stoppen, sobald sie sich etabliert haben. Die Farbe allein reicht nicht für eine Diagnose.

2. Welches Medium ist betroffen?

Substrat, Agar, Flüssigmyzel: Die Rettungsstrategien unterscheiden sich je nach betroffenem Medium grundlegend. Ein kontaminierter Substratblock wird nicht wie eine kontaminierte Petrischale behandelt.

Welcher Besiedlungsstand, welche Entscheidung?

Der Besiedlungsstand muss zusammen mit der Art der Kontamination gelesen werden. Bei einem gut besiedelten Block kann eine kleine, streng lokal begrenzte Kontamination gegebenenfalls beobachtet werden, der Block bleibt isoliert. Bei einem halb besiedelten Block kann eine kleine, stabile Kontamination gegebenenfalls 48 Stunden lang beobachtet werden, der Block bleibt vom Rest getrennt. Bei einem kaum besiedelten Block ist Aufgeben in der Regel die vernünftigste Entscheidung. Bei einem als Trichoderma identifizierten Schimmel, der schnell wächst, ist es in der Regel besser, den Block unabhängig vom Stand zu entsorgen, um keine gesunde Fruchtungskammer zu gefährden.

Einen kontaminierten Substratblock retten

Das ist der häufigste Fall, und der, der je nach Besiedlungsstand die meisten Optionen bietet.

Gut besiedelter Block mit lokaler Kontamination: aktive Beobachtung

Das ist die günstigste Situation. Ein gut etabliertes Myzel kann manche lokal begrenzten Kontaminationen mitunter verlangsamen oder eindämmen. Die Strategie: nichts tun, aber täglich beobachten.

Bleibt die Kontamination 48 bis 72 Stunden lang streng lokal begrenzt und zeigen sich keine neuen Anzeichen, kann der Block gegebenenfalls isoliert unter Beobachtung bleiben, ohne ihn in Ihrem Zuchtraum zu öffnen. Das garantiert jedoch nicht, dass die Kontamination anderswo im Substrat fehlt.

Wächst die Stelle weiter, auch nur langsam, entsorgen Sie den Block sofort.

Kaum besiedelter Block: der überlegte Verzicht

Ist der Block kaum besiedelt, sind die Kräfteverhältnisse ungünstig. Die Kontamination hat genauso viel Platz wie das Myzel, oft mehr. Einen solchen Block retten zu wollen, kostet Zeit und riskiert, andere Kulturen zu kontaminieren.

Packen Sie den Block in einen verschlossenen Plastiksack, bringen Sie ihn aus Ihrem Zuchtraum und beginnen Sie auf gesunder Basis neu. Das ist frustrierend, aber in der Regel die vernünftigste Entscheidung.

Soll man die kontaminierte Stelle herausschneiden?

Diese Idee taucht oft auf: den befallenen Teil entfernen und den Rest behalten. Wir raten davon ab. Der sichtbare Bereich entspricht nicht unbedingt der gesamten Ausdehnung der Kontamination, und das Aufschneiden des Blocks kann Sporen in der Raumluft verteilen. Wenn Sie einige Zentimeter um die Stelle herum entfernen, ist der Rest des Blocks deshalb noch nicht als gesund zu betrachten: Der Verursacher kann bereits über das Sichtbare hinaus vorhanden sein. Das Risiko für den Rest Ihrer Kultur ist deutlich grösser als der mögliche Gewinn.

Block in der Fruchtung: was tun mit den Pilzen?

Ein Block, der fruchtet und gleichzeitig kontaminiert wird, erfordert Vorsicht. Aus Vorsicht sollten Sie Fruchtkörper aus einem kontaminierten Block besser nicht verzehren, auch wenn sie gesund aussehen. Sie können sie aber vom Block entfernen, und wenn Ihnen der Stamm wichtig ist, kann ein gesunder Fruchtkörper gegebenenfalls als Ausgangsmaterial für einen Klon auf Agar dienen.

Entsorgen Sie den Block anschliessend sauber. Versuchen Sie nicht, auf einem kontaminierten Block einen zweiten Flush auszulösen.

Den Stamm statt des Blocks retten

Oft ist der Block verloren. Doch die Genetik lässt sich retten. Das ist ein wichtiger Unterschied: Auf Dauer hat der Stamm Wert, nicht der Block.

Wenn Ihr Block stellenweise gut besiedelt ist und Sie an diesem Stamm hängen, entnehmen Sie ein kleines Stück gesundes Myzel, möglichst weit von der Kontamination entfernt, und übertragen Sie es auf eine Petrischale mit Agar. Gearbeitet wird unter einer Laminar-Flow-Haube oder in einer Still Air Box, unter angemessenen aseptischen Bedingungen und nicht an der offenen Luft. Sie verlieren den Block, behalten aber den Stamm und können ihn sauber weitervermehren.

Eine Kultur auf Agar retten

Agar ist das Medium mit den meisten Rettungsmöglichkeiten, vorausgesetzt, Sie handeln schnell und sauber.

Die Isolierung auf Agar: die Rettungstechnik

Ist die Kontamination gut lokalisiert und besiedelt gesundes Myzel noch einen grossen Teil der Schale, lässt sich der Stamm oft retten. Das ist einer der wenigen Fälle, in denen man wirklich etwas zurückgewinnen kann. Die Methode heisst Isolierung: Man entnimmt nur sauberes Myzel und überträgt es auf eine neue Schale.

Voraussetzungen für die Isolierung: Die Kontamination muss klar lokalisiert und weit genug von der Wachstumsfront des Myzels entfernt sein, damit eine saubere Entnahme möglich ist. Ist die Kontamination diffus, grün und sporulierend oder wächst sie schnell, geben Sie sofort auf.

• Alles vorbereiten: Legen Sie 2 oder 3 frische, sterile Petrischalen bereit. Arbeiten Sie unter einer Laminar-Flow-Haube oder in einer Still Air Box, unter möglichst aseptischen Bedingungen. Desinfizieren Sie alles: Arbeitsfläche, Handschuhe.
• Werkzeug sterilisieren: Sterilisieren Sie die Skalpellklinge in der Flamme und lassen Sie sie einige Augenblicke abkühlen, ohne sie auf eine unsterile Fläche zu legen. Berühren Sie die Klinge nie mit den Fingern.
• Die kontaminierte Schale möglichst wenig öffnen: Heben Sie den Deckel nur leicht an. Suchen Sie die gesündeste Myzelzone, möglichst weit von der Kontamination entfernt (die «Leading Edge», die Wachstumsfront). Entnehmen Sie ein kleines Stück und achten Sie darauf, die kontaminierte Zone weder zu berühren noch darüber hinwegzuführen.
• Sofort übertragen: Legen Sie das Stück vorsichtig auf die vorbereitete neue Petrischale. Schliessen Sie beide Schalen rasch, um die Belastung durch die Raumluft gering zu halten.
• Versiegeln und beobachten: Umwickeln Sie die neue Schale mit Parafilm und stellen Sie sie unter den üblichen Inkubationsbedingungen des Stamms ein. Kontrollieren Sie sie mindestens 72 Stunden lang täglich. Tritt erneut eine Kontamination auf, kann das darauf hindeuten, dass kontaminierendes Material mit übertragen wurde: Wiederholen Sie die Isolierung oder geben Sie den Stamm auf.

Kehrt die Kontamination nach mehreren Übertragungen systematisch zurück, ist der Stamm wahrscheinlich zu stark beeinträchtigt, um zuverlässig gerettet zu werden. Entsorgen Sie ihn sauber und starten Sie mit einem anderen Stamm oder einem neuen Sporenabdruck neu.

Wann man eine Schale aufgeben sollte

Ist die Kontamination auf der Schale weit ausgedehnt oder handelt es sich um ein aggressives Trichoderma, das schnell wächst, verschliessen Sie die Schale dicht und entsorgen Sie sie. Eine Petrischale kostet wenig.

Was tun bei kontaminiertem Flüssigmyzel?

Ein als kontaminiert bestätigtes Flüssigmyzel (LC) lässt sich nicht retten. Anders als bei Agar kann man in einer homogenen Flüssigkeit nicht einfach einen gesunden Bereich isolieren.

Ist ein LC kontaminiert, kann der Verursacher in der gesamten Lösung vorhanden sein, auch wenn er noch nicht sichtbar ist. Wer ein kontaminiertes LC verwendet, kontaminiert in der Folge alles, was damit beimpft wird.

Ist ein LC dagegen nur verdächtig, ohne klar sichtbare Kontamination, kann es vor jeder Verwendung auf Agar getestet werden: Geben Sie einen Tropfen auf eine Petrischale mit Agar und beobachten Sie sie 48 bis 72 Stunden lang. Tritt eine Kontamination auf, haben Sie Ihre Bestätigung. Tritt keine auf und wächst das Myzel normal, ist das ein beruhigender Hinweis, garantiert für sich allein aber nicht, dass das LC frei von Kontamination ist.

Wenn Sie alles über Flüssigkulturen erfahren und solche Situationen vermeiden möchten, lesen Sie unseren Artikel über die Flüssigkultur.

Wann Aufgeben besser ist

In manchen Situationen kostet der Rettungsversuch mehr Zeit, als er bringt. Entsorgen Sie sauber und beginnen Sie neu.

• Ein Block mit ausgedehnter schwarzer Kontamination oder fauligem Geruch
• Ein Flüssigmyzel mit sichtbarer Kontamination, ungewöhnlicher Gärung oder auffälligem Geruch
• Eine grüne Kontamination, die massiv sporuliert, mit sichtbarer Wolke aus grünem Pulver
• Ein von Larven befallenes Substrat
• Eine Kontamination, die trotz Isolierung jeden Tag sichtbar fortschreitet

• Eine lokale Kontamination auf einem gut besiedelten Block lässt sich mitunter eindämmen: isolieren und beobachten, ohne einzugreifen
• Bei einem halb besiedelten Block hängt alles von der Aggressivität ab: lokale Bakterien, kurze Beobachtung; schnell wachsender Schimmel, aufgeben
• Bei einem kaum besiedelten Block gilt: aufgeben und neu beginnen, das ist in der Regel die beste Entscheidung
• Der Block ist oft verloren, aber der Stamm lässt sich retten, indem man gesundes Myzel auf Agar überträgt
• Auf Agar lässt sich eine lokale Kontamination durch Isolierung der gesunden Zone auf eine frische Schale retten
• Ein als kontaminiert bestätigtes Flüssigmyzel lässt sich nicht retten; ein verdächtiges LC wird vor jeder Verwendung auf Agar getestet
• Öffnen Sie einen kontaminierten Block nie in Ihrem Zuchtraum: doppelter, verschlossener Plastiksack, bevor Sie ihn hinaustragen
• Zu wissen, wann man aufgibt, ist eine Fähigkeit und kein Scheitern

Darf man Pilze essen, die von einem kontaminierten Block geerntet wurden?

Aus Vorsicht sollten Sie Fruchtkörper aus einem Block mit Kontamination besser nicht verzehren. Haben Sie Zweifel an ihrem Zustand, ihrem Geruch oder ihrem Aussehen, essen Sie sie nicht.

Mein Block riecht schlecht, aber ich sehe keine Kontamination. Was tun?

Ein saurer, säuerlicher oder fauliger Geruch kann auf eine bakterielle Kontamination oder einen Abbau des Substrats hindeuten, auch wenn noch keine Kontamination sichtbar ist. Isolieren Sie den Block im Zweifel und fassen Sie ihn möglichst wenig an.

Wie lange kann man einen kontaminierten Block unter Beobachtung lassen?

Rechnen Sie mit 48 bis 72 Stunden für eine erste Einschätzung. Ist die Kontamination nicht sichtbar fortgeschritten, können Sie die Beobachtung fortsetzen, der Block bleibt isoliert. Schreitet sie auch nur leicht fort, entsorgen Sie den Block sofort.

Kann man einen Stamm retten, wenn der Block verloren ist?

Oft ja. Bleibt eine Myzelzone gesund, entnehmen Sie ein kleines Stück weit weg von der Kontamination und übertragen Sie es auf Agar, unter einer Laminar-Flow-Haube oder in einer Still Air Box. Mehrere aufeinanderfolgende Übertragungen können nötig sein, um eine optisch saubere und ausreichend zuverlässige Kultur für die weitere Vermehrung zu erhalten.

Fazit

Eine kontaminierte Kultur zu retten heisst zunächst, die Lage nüchtern zu lesen. Nicht zu optimistisch, sonst riskieren Sie, alles andere zu kontaminieren. Nicht zu pessimistisch, sonst werfen Sie weg, was sich noch hätte retten lassen. Die Regel ist einfach: Je weiter die Besiedlung fortgeschritten ist, desto mehr Spielraum haben Sie. Je aggressiver die Kontamination, desto weniger. Lernen Sie, diese Faktoren zusammen zu lesen, und Sie treffen treffsicherere Entscheidungen mit weniger unnötigen Risiken. Und wenn Sie verstehen möchten, wie es gar nicht erst so weit kommt, ist unser Artikel über die häufigsten Anfängerfehler die logische nächste Lektüre. Vorbeugen ist besser als retten.

Eine Frage zu diesem Artikel? Eine Erfahrung, die Sie teilen möchten? oder eine Bewertung, wir lesen alles und antworten gern.