Comment utiliser le mycélium sur agar

Vous avez reçu votre boîte de Petri de mycélium sur agar ? Vous êtes au bon endroit. L’agar est l’outil le plus précis pour travailler le mycélium, mais il demande un peu de rigueur. Voici tout ce qu’il faut savoir pour réussir votre transfert du premier coup.

Niveau de difficulté : intermédiaire. Plus technique que le mycélium liquide, mais bien plus lisible : toute contamination se voit immédiatement à l’œil nu.

En 4 étapes

• Sortez la boîte du frigo 30 minutes avant utilisation
• Vérifiez-la : le mycélium doit être blanc et homogène, sans trace verte, noire, orange ou jaune
• Travaillez en still air box ou sous hotte, gants désinfectés, scalpel flambé puis refroidi
• Découpez un carré de mycélium d’environ 1 cm² et transférez-le sur culture liquide, grain stérilisé ou nouvel agar

Ce que c’est en deux mots

Le mycélium sur agar, c’est une souche pure de mycélium cultivée sur un milieu nutritif gélifié dans une boîte de Petri. Il sert à transférer votre souche sur culture liquide ou grain stérilisé, ou à la conserver sur le long terme. C’est l’inoculant de référence pour les cultivateurs qui veulent un contrôle total sur leurs cultures.

Vous souhaitez créer vos propres cultures sur agar ? Notre guide complet

Avant de commencer

L’agar se travaille à l’air libre, et c’est là que tout se joue. Contrairement à la seringue de mycélium liquide qui s’injecte via un port fermé, ouvrir une boîte de Petri expose directement votre souche à l’environnement. Travailler dans un espace protégé est non négociable.

• Vérifiez la boîte : le mycélium doit être blanc et homogène. Toute coloration verte, noire, orange ou jaune est signe de contamination, et il ne faut alors pas utiliser la boîte
• Travaillez dans une still air box (SAB) ou sous une hotte à flux laminaire
• Désinfectez vos mains et vos gants à l’alcool à 70%
• Flambez votre scalpel (briquet ou lampe à alcool) et laissez-le refroidir quelques secondes avant de toucher l’agar
• Ne parlez pas, ne toussez pas au-dessus de vos boîtes ouvertes

Comment l’utiliser

Transfert sur culture liquide

• Ouvrez votre bocal de culture liquide dans votre SAB ou sous hotte
• Ouvrez la boîte de Petri et découpez un carré de mycélium d’environ 1 cm² avec votre scalpel
• Déposez le fragment directement dans le bocal et refermez immédiatement
• Placez sur agitateur magnétique si possible pour accélérer la colonisation
• Après 5 à 10 jours, le mycélium a colonisé la solution : elle est prête à être utilisée via le port d’injection

Pour tout savoir sur la préparation et l’utilisation de la culture liquide, consultez notre guide sur la culture liquide.

Transfert sur grain stérilisé

• Ouvrez la boîte de Petri dans votre SAB ou sous hotte
• Découpez plusieurs carrés de mycélium d’environ 1 cm² avec votre scalpel
• Déposez les fragments directement sur vos grains stérilisés via l’ouverture du sac
• Refermez le sac immédiatement et scellez-le
• Placez en incubation à l’obscurité, vers 22 à 25°C

Pour préparer votre propre grain stérilisé, consultez notre guide sur la préparation du grain stérilisé.

Conservation et transfert sur nouvel agar

• Ouvrez les deux boîtes de Petri côte à côte dans votre SAB ou sous hotte
• Découpez un carré de mycélium d’environ 1 cm² dans la boîte source
• Déposez-le au centre de la nouvelle boîte de Petri avec milieu frais
• Refermez immédiatement et scellez les bords au Parafilm
• Placez à l’obscurité, vers 22 à 25°C : la colonisation prend 5 à 14 jours

Pour préparer vos propres boîtes de Petri, consultez notre guide sur la culture sur agar.

Comment le stocker

La boîte de Petri se conserve au réfrigérateur entre 2 et 6°C, à l’abri de la lumière, jusqu’à 3 mois. Scellez toujours les bords au Parafilm si vous la conservez : cela limite les échanges d’air et ralentit le dessèchement du milieu.

Stockez les boîtes à l’envers au réfrigérateur : cela évite que la condensation se dépose directement sur le mycélium.

Sortez-la du frigo 30 minutes avant utilisation pour éviter la condensation à l’intérieur de la boîte au moment de l’ouverture.

• Niveau intermédiaire : plus technique que la culture liquide, mais contamination visible immédiatement
• Vérifier la boîte avant usage : mycélium blanc et homogène
• Travailler obligatoirement en still air box ou sous hotte à flux laminaire
• Flamber le scalpel et laisser refroidir avant chaque coupe
• Carrés de mycélium d’environ 1 cm² pour chaque transfert
• Conservation au frigo entre 2 et 6°C, jusqu’à 3 mois
• Sortir du frigo 30 minutes avant utilisation
• Sceller au Parafilm pour la conservation
• Stocker les boîtes à l’envers au frigo pour éviter la condensation sur le mycélium

Quelle différence entre mycélium sur agar et mycélium liquide ?

Le mycélium liquide s’injecte directement via un port fermé : plus simple, sans risque d’exposition à l’air. L’agar demande une manipulation à l’air libre et donc un environnement protégé, mais il offre un contrôle visuel total sur la santé de la souche et permet de la multiplier à l’infini par transferts successifs.

Peut-on utiliser la boîte de Petri directement sur substrat de fructification ?

Non, la boîte de Petri sert à inoculer une culture liquide ou du grain stérilisé, pas directement un substrat de fructification. Le mycélium sur grain reste l’étape intermédiaire indispensable avant l’ensemencement du substrat.

Comment savoir si mon agar est contaminé ?

Toute coloration inhabituelle sur le mycélium est un signal d’alarme : vert ou noir pour les moisissures, orange ou jaune pour les bactéries. Une odeur aigre ou inhabituelle est aussi un signe de contamination. Attention toutefois : certaines espèces, comme le pleurote rose, ont naturellement un mycélium légèrement rosé, ce qui n’est pas une contamination. Dans le doute, ne l’utilisez pas.

Combien de transferts peut-on faire depuis une boîte de Petri ?

Une boîte bien colonisée permet de faire plusieurs dizaines de transferts, car chaque carré prélevé ne représente qu’une petite partie de la boîte. En conservant une partie de la boîte pour faire de nouveaux transferts sur agar frais, vous pouvez théoriquement conserver une souche indéfiniment.